1. IHC實驗結(jié)果顯色過深 一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間 孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育 2. 實驗結(jié)果存在非特異性顯色 石蠟切片脫蠟——延長脫蠟時間 蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間 組織富含內(nèi)源性生物素與過氧化物酶——使用相關(guān)試劑進行封閉 3. 實驗結(jié)果顯色弱或無染色 一抗?jié)舛冗^低或孵育時間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時間 組織中無目的抗原的表達 一抗種屬來源與二抗不匹配 注意事項 切片脫蠟和水化要充分,加反應(yīng)液時要覆蓋組織充分;每次加液前甩干洗滌液,同時防止干片。 一抗的沖洗原則:單獨沖洗,防交叉反應(yīng)污染;溫柔沖洗,防止切片脫落;推薦浸洗方式。 有條件的話最好立即拍照,若不能及時拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。 |
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